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Plataforma de citometría

La plataforma de citometría incorpora las tecnologías más recientes en el ámbito de la citometría de flujo, aplicadas tanto al análisis como a la separación celular. Las técnicas citométricas permiten analizar y clasificar de forma rápida y sencilla un número significativo de células con gran sensibilidad y objetividad. También se pueden obtener mediciones cualitativas y cuantitativas y definir subpoblaciones de células complejas a partir del estudio de un conjunto de parámetros definidos para cada célula concreta.

Durante los últimos años, se ha desarrollado la citometria "full-spectrum", que permite resolver más fluorocromos individuales recogiendo y procesando los datos como espectros completos. Así, es posible diseñar paneles de inmunofenotipado con más de 40 parámetros fluorescentes, además de presentar otras ventajas importantes en relación con la citometría convencional. Recientemente, se han desarrollado equipos separadores que incorporan esta tecnología, como el Aurora CS del que dispone la UAT.

Servicios:

  • Análisis celular por citometría de flujo.
  • Separación celular activada por fluorescencia (FACS).
  • Análisis de biomarcadores genómicos y proteómicos multiplexados.

También se ofrece formación en el uso autónomo del equipamiento, asesoramiento sobre técnicas de citometría, puesta a punto de protocolos, diseño de paneles, soporte en la interpretación de los resultados y análisis de datos.

Podéis encontrar el "manual de bienvenida" a la plataforma de citometría aquí.

Aplicaciones:

  • Citometría de flujo:
    • Inmunofenotipado a partir del marcaje de antígenos de superficie e interacelulares.
    • Análisis de ácidos nucleicos (ploidia, ciclo celular).
    • Análisis funcional (p. ej., actividad enzimática, integridad celular, permeabilidad de la membrana, flujos de calcio).
    • Viabilidad, proliferación, ensayos de apoptosis.
    • Evaluación de la eficiencia de transfección (p. ej., GFP, mCherry, etc.).
    • Análisis de partículas pequeñas.
  • Separación celular:
    • Aislamiento de poblaciones de células bien definidas a partir de muestras heterogéneas (hasta 6 poblaciones a la vez).
    • Aislamiento de poblaciones raras (p. ej., CTCs, CSCs).
    • Aislamiento de células marcadas con fluorescencia (p. ej., las células transfectadas).
    • Aislamiento de una sola célula en placas de 96 pocillos.
  • Análisis de biomarcadores genómicos y proteómicos multiplexados. Los ensayos multiplex con tecnología Luminex ® se han concebido para la detección y la cuantificación simultánea de varias proteínas secretadas como las citocinas, las quimiocinas o los factores de crecimiento, o bien los genes expresados. Esta tecnología de alto rendimiento genera resultados comparables a los de ensayos convencionales como la técnica ELISA, con el uso de un volumen de muestra reducido (25 µl de plasma o 50 µl de sobrenadante de cultivo celular) en formato de placa de 96 pocillos.

Para cualquier duda, podéis contactar con nosotros en citometria@vhir.org.

Equipamiento:

  • Citómetros de flujo:
    • Analizador celular FacsCalibur (Becton Dickinson): Actualmente solo dispone de un láser azul, que permite la detección de dos fluorocromos en este rango espectral (más FSC y SSC). 
    • Analizador celular LSRFortessa (BD): 4 làseres (azul, rojo, violeta y amarillo-verde) para la detección en paralelo de hasta 16 fluorocromos (más FSC y SSC). Adquisición en tubo y en formato HTS (placas de 96 y 384 pocillos).
  • Separadores celulares:
    • Separador celular de alta velocidad FACSAria (BD): 4 láseres (azul, rojo, violeta y amarillo-verde) para la detección de hasta 13 fluorocromos (más FSC y SSC). Separación en 4 vías (tubos de recogida de 0,5 a 15ml) y en placas de 6 a 96 pocillos, incluyendo separación de célula única en placa de 96 pocillos. La configuración de los citómetros se puede consultar aquí.
    • Separador celular con tecnología espectral Aurora CS (Cytek): se trata de un equipo con tecnología "full-spectrum", que detecta y procesa la huella espectral de cada fluorocromo, hecho que ofrece múltiples ventajas en relación con la citrometría convencional: incremento del número de fluorocromos que se pueden detectar en un mismo panel, extracción de la auto-fluorescencia tratándola como un parámetro independiente y distinción entre fluorocromos con máximos de emisión muy similares.
      • Este separador está equipado con cinco láseres (near-UV, violeta, azul, amarillo-verde y rojo) más una matriz de detectores de fluorescencia para cada láser (captura desde 365 hasta 829 nm), además de FSC y dos SSCs (uno de ellos optimizado para partículas pequeñas), con un total de 67 canales de detección. El equipo permite la separación hasta 6 vías o en placas de 96 pocillos, con la opción "index sorting". Este equipo también se puede utilizar como analizador.
      • El equipo está incorporado dentro de una cabina de bioseguridad clase II, tipo 2A, que permite trabajar con muestras infectadas con organismos patógenos dentro del nivel de seguridad biológica nombrado previamente.
  • Análisis de biomarcadores genómicos y proteómicos multiplexados
    • Luminex Magpix: este equipo de análisis multiplex realiza hasta 50 tests diferentes en un solo volumen de reacción, y permite leer una placa de 96 pocillos en ≤ 60 minutos. Compatible con ProcartaPlex (inmunoensayos para proteínas secretadas), QuantiGene Plex (transcritos de ARN) y otros kits basados en bolitas. Los reslutados se pueden exportar y analizar con el programario ProcartaPlex Analyst.
  • Paquetes de programario para el análisis de datos
    • Disponemos de dos estaciones "off-line" para el análisis de datos con programario específico de citometría:
      • FlowJo: 1 licencia instalada localmente en la estación de análisis 1 (accesible in situ y en remoto).
      • FCS-Express 7: 1 licencia, accesible en la "nube" previo registro. Es necesario solicitar acceso al personal de la UAT.
      • SpectroFlo: programario para la adquisición y análisis inicial de datos de citometría espectral. 1 licencia instalada localmente en la estación de análisis 4 (accesible in situ y en remoto).
      • OMIQ: programario dedicado al análisis de datos de alta dimensionalidad, especialmente datos especrales. Accesible en la "nube". Es necesario solicitar acceso al personal de la UAT.