Servicios:

• Análisis celular por citometría de flujo.
• Separación celular activada por fluorescencia (FACS).
• Análisis de biomarcadores genómicos y proteómicos multiplexados.

También se ofrece formación en el uso autónomo del equipamiento, asesoramiento sobre técnicas de citometría, puesta a punto de protocolos, diseño de paneles, soporte en la interpretación de los resultados y análisis de datos.

• Podéis encontrar el "manual de bienvenida" a la plataforma de citometría aquí.
• Podéis encontrar la configuración de los citómetros aquí.

Aplicaciones:

• Citometría de flujo:
  • Inmunofenotipado a partir del marcaje de antígenos de superficie e interacelulares.
  • Análisis de ácidos nucleicos (ploidia, ciclo celular).
  • Análisis funcional (p. ej., actividad enzimática, integridad celular, permeabilidad de la membrana, flujos de calcio).
  • Viabilidad, proliferación, ensayos de apoptosis.
  • Evaluación de la eficiencia de transfección (p. ej., GFP, mCherry, etc.).
  • Análisis de partículas pequeñas.
• Separación celular:
  • Aislamiento de poblaciones de células bien definidas a partir de muestras heterogéneas (hasta 6 poblaciones a la vez).
  • Aislamiento de poblaciones raras (p. ej., CTCs, CSCs).
  • Aislamiento de células marcadas con fluorescencia (p. ej., las células transfectadas).
  • Aislamiento de una sola célula en placas de 96 pocillos.
• Análisis de biomarcadores genómicos y proteómicos multiplexados. Los ensayos multiplex con tecnología Luminex ® se han concebido para la detección y la cuantificación simultánea de varias proteínas secretadas como las citocinas, las quimiocinas o los factores de crecimiento, o bien los genes expresados. Esta tecnología de alto rendimiento genera resultados comparables a los de ensayos convencionales como la técnica ELISA, con el uso de un volumen de muestra reducido (25 µl de plasma o 50 µl de sobrenadante de cultivo celular) en formato de placa de 96 pocillos.

Para cualquier duda, podéis contactar con nosotros en citometria@vhir.org.

Equipamiento:

• Citómetros de flujo:
  • Analizador celular FacsCalibur (Becton Dickinson): Actualmente solo dispone de un láser azul, que permite la detección de dos fluorocromos en este rango espectral (más FSC y SSC). 
  • Analizador celular LSRFortessa (BD): 4 làseres (azul, rojo, violeta y amarillo-verde) para la detección en paralelo de hasta 16 fluorocromos (más FSC y SSC). Adquisición en tubo y en formato HTS (placas de 96 y 384 pocillos).
• Separadores celulares:
  • Separador celular de alta velocidad FACSAria (BD): 4 láseres (azul, rojo, violeta y amarillo-verde) para la detección de hasta 13 fluorocromos (más FSC y SSC). Separación en 4 vías (tubos de recogida de 0,5 a 15ml) y en placas de 6 a 96 pocillos, incluyendo separación de célula única en placa de 96 pocillos.
  • Separador celular con tecnología espectral Aurora CS (Cytek): se trata de un equipo con tecnología "full-spectrum", que detecta y procesa la huella espectral de cada fluorocromo, hecho que ofrece múltiples ventajas en relación con la citrometría convencional: incremento del número de fluorocromos que se pueden detectar en un mismo panel, extracción de la auto-fluorescencia tratándola como un parámetro independiente y distinción entre fluorocromos con máximos de emisión muy similares.
    • Este separador está equipado con cinco láseres (near-UV, violeta, azul, amarillo-verde y rojo) más una matriz de detectores de fluorescencia para cada láser (captura desde 365 hasta 829 nm), además de FSC y dos SSCs (uno de ellos optimizado para partículas pequeñas), con un total de 67 canales de detección. El equipo permite la separación hasta 6 vías o en placas de 96 pocillos, con la opción "index sorting". Este equipo también se puede utilizar como analizador.
    • El equipo está incorporado dentro de una cabina de bioseguridad clase II, tipo 2A, que permite trabajar con muestras infectadas con organismos patógenos dentro del nivel de seguridad biológica nombrado previamente.
• Análisis de biomarcadores genómicos y proteómicos multiplexados
  • Luminex Magpix: este equipo de análisis multiplex realiza hasta 50 tests diferentes en un solo volumen de reacción, y permite leer una placa de 96 pocillos en ≤ 60 minutos. Compatible con ProcartaPlex (inmunoensayos para proteínas secretadas), QuantiGene Plex (transcritos de ARN) y otros kits basados en bolitas. Los reslutados se pueden exportar y analizar con el programario ProcartaPlex Analyst.
• Paquetes de programario para el análisis de datos
  • Disponemos de dos estaciones "off-line" para el análisis de datos con programario específico de citometría:
    • FlowJo: 1 licencia instalada localmente en la estación de análisis 1 (accesible in situ y en remoto).
    • FCS-Express 7: 1 licencia, accesible en la "nube" previo registro. Es necesario solicitar acceso al personal de la UAT.
    • SpectroFlo: programario para la adquisición y análisis inicial de datos de citometría espectral. 1 licencia instalada localmente en la estación de análisis 4 (accesible in situ y en remoto).
    • OMIQ: programario dedicado al análisis de datos de alta dimensionalidad, especialmente datos especrales. Accesible en la "nube". Es necesario solicitar acceso al personal de la UAT.