Plataforma de citometría La plataforma de citometría incorpora las tecnologías más recientes en el ámbito de la citometría de flujo, aplicadas tanto al análisis como a la separación celular. Las técnicas citométricas permiten analizar y clasificar de manera rápida y sencilla un número significativo de células con gran sensibilidad y objetividad. También se pueden obtener mediciones cualitativas y cuantitativas y definir subpoblaciones de células complejas a partir del estudio de un conjunto de parámetros definidos para cada célula concreta. Durante los últimos años, se ha desarrollado la citometría "full-spectrum", que se basa en la detección del espectro de emisión completo de cada fluorocromo, en lugar de picos de emisión discretos. Esto permite un incremento considerable en la cantidad de fluorocromos que se pueden detectar simultáneamente (más de 40), incluso aquellos que tienen un espectro de emisión superpuesto. Esto permite realizar estudios de inmunofenotipado con mucha resolución, así como la extracción de autofluorescencia, tratándola como un parámetro independiente. Nuestros citómetros espectrales ofrecen alta sensibilidad y resolución en todo el rango del espectro de 365 a 829 nm, lo que facilita la detección de poblaciones minoritarias, aunque no trabajen con un número elevado de fluorocromos. La UAT ofrece dos equipos de última generación, un analizador Aurora y un separador celular Aurora CS, ambos equipados con la misma configuración de 5 láseres. Servicios: Análisis celular por citometría de flujo, convencional y espectral. Separación celular activada por fluorescencia (FACS), convencional y espectral. Análisis multiplexado de biomarcadores genómicos y proteómicos. También se ofrece formación en el uso autónomo del equipamiento, asesoramiento sobre técnicas de citometría, puesta a punto de protocolos, diseño de paneles, soporte en la interpretación de los resultados y análisis de datos. Para cualquier duda, pueden contactarnos en citometria@vhir.org. Aplicaciones: Citometría de flujo: Inmunofenotipado a partir del marcaje de antígenos de superficie e interacelulares. La citometría espectral permite el análisis multiparamétrico de poblaciones celulares con alta autofluorescencia o niveles bajos de expresión de marcadores. Análisis de ácidos nucleicos (ploidia, ciclo celular). Análisis funcional (p. ej., actividad enzimática, integridad celular, permeabilidad de la membrana, flujos de calcio). Viabilidad, proliferación, ensayos de apoptosis. Evaluación de la eficiencia de transfección (p. ej., GFP, mCherry, etc.). Análisis de partículas pequeñas. Separación celular: Aislamiento de poblaciones de células bien definidas a partir de muestras heterogéneas (hasta 6 poblaciones a la vez), definidas según combinaciones de marcadores fluorescentes. Separación de poblaciones raras (CTCs, CSCs...), poblaciones con niveles bajos de expresión de marcadores y/o altos niveles de autofluorescencia. Separación de célula única en placas de 96 pocillos ("index sorting"). Separación de células fluorescentes para aplicaciones posteriores, por ejemplo, ensayos funcionales, selección para expansión clonal de células modificadas (transfección, infección, CRISPR/Cas9), generación de modelos preclínicos... Análisis de biomarcadores genómicos y proteómicos multiplexados. Los ensayos multiplex con tecnología Luminex ® se han concebido para la detección y la cuantificación simultánea de varias proteínas secretadas como las citocinas, las quimiocinas o los factores de crecimiento, o bien los genes expresados. Esta tecnología de alto rendimiento genera resultados comparables a los de ensayos convencionales como la técnica ELISA, con el uso de un volumen de muestra reducido (25 µl de plasma o 50 µl de sobrenadante de cultivo celular) en formato de placa de 96 pocillos. Equipamientos principales Citómetro analizador LSRFortessa (Becton Dickinson) 4 láseres: 405, 488, 561 y 633 nm. 16 detectores de fluorescencia + FSC +SSC. Adquisición en tubo y HTS para adquisición en placa. Citómetro analizador espectral Aurora (Cytek) 5 láseres: 355, 405, 488, 561 y 633 nm. 64 canales de detección de fluorescencia (entre 365 y 829 nm). Detector FSC, SSC y SSC específico para partícula pequeña (hasta 100 nm). Adquisición en tubo. Separador celular espectral Aurora CS (Cytek) 5 láseres: 355, 405, 488, 561 y 633 nm. 64 canales de detección de fluorescencia (entre 365 y 829 nm). Detector FSC, SSC y SSC para partícula pequeña (hasta 100 nm). Separación de hasta 6 vías. Separación en placa con opción "índex sorting". Incluido dentro de una CBS clase II tipo 2A. Luminex Magpix Equipo de análisis multiplex: Realiza hasta 50 pruebas diferentes en un solo volumen de reacción. Lee una placa de 96 pocillos en ≤ 60 minutos. Compatible con diferentes ensayos basados en "beads". Por ejemplo: ProCartaPlex (proteínas secretadas) y QuantiGene Plex (transcritos). Software de análisis de datos de citometría 3 licencias de FlowJo (estaciones 1, 4 y 5). 2 licencias de SpectroFlo, para el análisis inicial de archivos de datos de citometría espectral, adquiridos con el analizador Aurora (estación 6) o el separador Aurora CS (estación 4). 1 licencia de OMIQ para análisis de datos de alta dimensionalidad, especialmente de citometría espectral (nube). Las estaciones 1-4 y 6 son accesibles tanto presencialmente como en remoto (VPN). La 5 es solo accesible en remoto (VPN) < > Configuración completa de los citómetros
