Plataforma de citometria La plataforma de citometria incorpora les tecnologies més recents en l'àmbit de la citometria de flux, aplicades tant a l'anàlisi com a la separació cel·lular. Les tècniques citomètriques permeten analitzar i classificar de manera ràpida i senzilla un nombre significatiu de cèl·lules amb gran sensibilitat i objectivitat. També es poden obtenir mesuraments qualitatius i quantitatius i definir subpoblacions de cèl·lules complexes a partir de l'estudi d'un conjunt de paràmetres definits per a cada cèl·lula concreta. Durant els darrers anys, s'ha desenvolupat la citometria "full-spectrum", que permet resoldre més fluorocroms individuals recollint i processant les dades com espectres sencers. Així, és possible dissenyar panels d'immunofenotipatge amb més de 40 paràmetres fluorescents, a més de presentar altres avantatges importants en relació amb la citometria convencional. Recentment, s'han desenvolupat equips separadors que incorporen aquesta tecnologia, com l'Aurora CS del que disposa la UAT. Serveis: Anàlisi cel·lular per citometria de flux. Separació cel·lular activada per fluorescència (FACS) Anàlisi de biomarcadors genòmics i proteòmics multiplexats. També s'ofereix formació en l'ús autònom de l'equipament, assessorament sobre tècniques de citometria, posada a punt de protocols, disseny de panels, suport en la interpretació dels resultats i anàlisi de dades. Podeu trobar el "manual de benvinguda" a la plataforma de citometria aquí. Podeu trobar la configuració dels citòmetres aquí. Aplicacions: Citometria de flux: Immunofenotipatge a partir del marcatge d'antígens de superfície i intracel·lulars Anàlisi d'àcids nucleics (ploïdia, cicle cel·lular) Anàlisi funcional (p. ex., activitat enzimàtica, integritat cel·lular, permeabilitat de la membrana, fluxos de calci). Viabilitat, proliferació, assajos d'apoptosi. Avaluació de l'eficiència de transfecció (p. ex., GFP, mCherry, etc.). Anàlisi de partícules petites Separació cel·lular: Aïllament de poblacions de cèl·lules ben definides a partir de mostres heterogènies (fins a 6 poblacions alhora). Aïllament de poblacions rares (p. ex., CTCs, CSCs). Aïllament de cèl·lules marcades amb fluorescència (p. ex., les cèl·lules transfectades). Aïllament d'una sola cèl·lula en plaques de 96 pouets. Anàlisi de biomarcadors genòmics i proteòmics multiplexats. Els assajos multiplex amb tecnologia Luminex ® s'han concebut per a la detecció i la quantificació simultània de diverses proteïnes secretades com ara les citocines, les quimiocines o els factors de creixement, o bé els gens expressats. Aquesta tecnologia d'alt rendiment genera resultats comparables als d'assajos convencionals com ara la tècnica ELISA, amb l'ús d'un volum de mostra reduït (25 µl de plasma o 50 µl de sobrenedant de cultiu cel·lular) en format de placa de 96 pouets. Per qualsevol dubte, podeu contactar amb nosaltres a citometria@vhir.org. Equipament: Citòmetres de flux: Analitzador cel·lular FacsCalibur (Becton Dickinson): Actualment només disposa d'un làser blau, que permet la detecció de dos fluorocroms en aquest rang espectral (més FSC i SSC). Analitzador cel·lular LSRFortessa (BD): 4 làsers (blau, vermell, violeta i groc-verd) per a la detecció en paral·lel de fins a 16 fluorocroms (més FSC i SSC). Adquisició en tub i en format HTS (plaques de 96 i 384 pouets). Separadors cel·lulars: Separador cel·lular d'alta velocitat FACSAria (BD): 4 làsers (blau, vermell, violeta i groc-verd) per a la detecció de fins a 13 fluorocroms (més FSC i SSC). Separació en 4 vies (tubs de recollida de 0,5 a 15 ml), i en plaques de 6 a 96 pouets, incloent separació de cèl·lula única en placa de 96 pouets Separador cel·lular amb tecnologia espectral Aurora CS (Cytek): es tracta d'un equip amb tecnologia "full-spectrum", que detecta i processa la petjada espectral de cada fluorocrom, fet que ofereix múltiples avantatges en relació amb la citometria convencional: increment del nombre de fluorocroms que es poden detectar en un mateix panell, extracció de l'auto-fluorescència tractant-la com un paràmetre independent i distinció entre fluorocroms amb màxims d'emissió molt semblants. Aquest separador està equipat amb cinc làsers (near-UV, violeta, blau, groc-verd i vermell) més una matriu de detectors de fluorescència per a cada làser (captura des de 365 fins a 829 nm), a més de FSC i dos SSCs (un d'ells optimitzat per partícules petites), amb un total de 67 canals de detecció. L'equip permet la separació fins a 6 vies o en plaques de 96 pouets, amb l'opció "index sorting". Aquest equip també es pot utilitzar com analitzador. L'equip està incorporat dins una cabina de bioseguretat clase II, tipus 2A, que permet treballar amb mostres infectades amb organismes patògens dins del nivell de seguretat biològica esmentat prèviament. Anàlisi de biomarcadors genòmics i proteòmics multiplexats Luminex Magpix: aquest equip d'anàlisi multiplex realitza fins a 50 tests diferents en un sol volum de reacció, i permet llegir una placa de 96 pouets en ≤ 60 minuts. Compatible amb ProcartaPlex (immunoassajos per a proteïnes secretades), QuantiGene Plex (transcrits d'ARN) i altres kits basats en boletes. Els resultats es poden exportar i analitzar amb el programari ProcartaPlex Analyst. Paquets de programari per a l'anàlisi de dades: Disposem de dues estacions "off-line" per a l'anàlisi de dades amb programari específic de citometria: FlowJo: 1 llicència instal·lada localment a l'estació d'anàlisi 1 (accessible in situ i en remot). FCS-Express 7: 1 llicència, accessible al "núvol" previ registre. Cal demanar accés al personal de la UAT. SpectroFlo: programari per a l'adquisició i anàlisi inicial de dades de citometria espectral. 1 llicència instal·lada localment a l'estació d'anàlisi 4 (accessible in situ i en remot). OMIQ: programari dedicat a l'anàlisi de dades d'alta dimensionalitat, especialment dades espectrals. Accessible al "núvol". Cal demanar accés al personal de la UAT.